CycleavePCR Starter Kit（製品コード CY505S）またはCycleavePCR Reaction Mix（製品コード CY505A/B）と組み合わせて使用し、取扱説明書に従って反応を行ってください。設計されたプライマー・プローブセットは、反応条件の至適化は不要です。 発現解析を行われる場合は、CY505の取扱説明書Appendix「RT-PCR を行う場合」に従ってPrimeScript RT Master Mix (Perfect Real Time) （製品コード RR036A）またはPrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time) （製品コード RR037A）を用いてcDNAを調製し、Templateとしてご使用ください。
■反応性確認
あらかじめ、陽性であることが明確な精製DNAサンプルを用い、プローブで検出できるか確認することをお勧めします。■使用方法
（1）用意するもの（主なもの）- CycleavePCR Starter Kit（製品コード CY505S）、またはCycleavePCR Reaction Mix（製品コード CY505A/B）＊
- PrimeScript RT Master Mix (Perfect Real Time) （製品コード RR036A）、またはPrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time) （製品コード RR037A）（リアルタイムRT-PCRを行う場合）
- CycleavePCR用プライマー・プローブ
- 鋳型
- リアルタイムPCR装置と専用チューブまたはプレート
＊ CycleavePCR Starter Kitは、CycleavePCR Reaction Mixに加え、試薬の反応性を確認するためのPositive Controlを含んでおり、反応系を構築する際に便利です。反応系構築後は、コストパフォーマンスの高いCycleavePCR Reaction Mixがお勧めです。
（2）プロトコール
＜Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズの場合＞
- 下記に示すPCR反応液を調製する。
ROX Reference Dyeは不要
反応液組成
＜1反応あたり＞
試薬 使用量 最終濃度 CycleavePCR Reaction Mix（2×） 12.5 μl 1× PCR Forward Primer（10 μM） 0.5 μl 0.2 μM PCR Reverse Primer（10 μM） 0.5 μl 0.2 μM サイクリングプローブ（5 μM） 1 μl 0.2 μM template（約1～100 ng/μl） 1 μl＊ 滅菌精製水 9.5 μl total 25 μl
＊ cDNAを用いる場合は、逆転写反応液 2.5 μl以下とし、total 25 μlになるように減菌精製水を添加してください。
- 以下のPCR条件で反応を開始する。
反応条件
（初期変性）
95℃ 10秒
（PCR反応：45サイクル）
95℃ 5秒
55℃ 10秒
72℃ 20秒（蛍光検出）
条件の詳細および他のリアルタイムPCR装置を用いる場合のPCR条件等については、CycleavePCR Starter KitまたはCycleavePCR Reaction Mixの取扱説明書をご参照ください。
